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第1章　目的基因的分离1

1.1 植物组织DNA的提取1

1.1.1 植物组织总DNA的提取2

1.1.2 植物细胞核DNA的提取6

1.1.3 植物细胞叶绿体DNA的提取7

1.1.4 植物细胞线粒体DNA的提取10

1.2　植物组织RNA的提取12

1.2.1 植物组织总RNA的提取12

1.2.2 mRNA的分离纯化14

1.3 目的基因的PCR扩增18

1.3.1 mRNA差别显示技术19

1.3.2 抑制性扣除杂交技术23

1.3.3 保守序列PCR克隆技术27

参考文献29

第2章　载体构建31

2.1　扩增体系建立31

2.1.1 大肠杆菌质粒DNA的提取31

2.1.2 DNA的限制性内切酶消化34

2.1.3 DNA片段的纯化回收35

2.1.4 目的基因与载体的连接37

2.1.5 重组质粒DNA转化大肠杆菌39

2.1.6 重组质粒细胞菌落的鉴定43

2.2　植物遗传转化载体构建44

2.2.1 根癌农杆菌Ti质粒DNA的提取44

2.2.2 Ti质粒转化载体的构建46

2.2.3 发根农杆菌Ri质粒DNA的提取47

2.3　组织特异性表达载体的构建48

2.3.1 组织特异性启动子与质粒DNA的酶切及回收48

2.3.2 组织特异性启动子与载体DNA片段的连接50

参考文献50

第3章　目的基因的转化51

3.1　农杆菌转化法51

3.1.1 烟草农杆菌叶盘转化52

3.1.2 拟南芥花序浸润转化55

3.1.3　水稻愈伤组织农杆菌转化56

3.1.4 发根农杆菌转化58

3.2　基因枪转化法59

3.2.1 小麦幼胚基因枪转化60

3.2.2 叶绿体遗传转化62

3.3 电穿孔法66

3.4　PEG介导的基因转化法68

参考文献71

第4章　转基因植物的鉴定73

4.1　标记基因的检测73

4.1.1 gus基因检测74

4.1.2　bar基因的检测80

4.1.3 GFP的检测83

4.2 目的基因的整合鉴定83

4.2.1 Southern印迹杂交83

4.2.2 RT-PCR96

4.2.3 Northern杂交98

4.2.4 荧光原位杂交（FISH）107

4.3　基因的表达分析112

4.3.1 SDS-PAGE分析112

4.3.2　Western印迹114

参考文献116

第5章　转基因植物的基因安全评价117

5.1 转基因小麦环境释放中花粉介导的基因漂移检测117

5.2　土壤微生物群落的检测120

5.3　转基因食品的毒理学评价122

5.3.1 急性毒性试验123

5.3.2 微核实验124

5.3.3　30天和90天喂养试验125

5.3.4 慢性毒性和致癌试验127

参考文献128

第6章　计算机在植物基因工程研究中的应用131

6.1 生物学相关软件131

6.1.1 Primer131

6.1.2 RasMol 2.6135

6.1.3 DNAStar137

6.1.4　进化树的软件139

6.2　生物学实用网站142

参考文献144

附录145

附录1 主要溶液（母液）及缓冲液的配制145

附录2　常用培养基的配制150

附录3 常用抗生素的配制及使用浓度152

附录4　凝胶浓度的有效分离范围152

附录5　常用的相对分子质量标准153

附录6　核酸的量与质量间的换算156